| |
Главная |
Кожные реакции замедленного типа. МетодикаКонтактная сенсибилизация мышей Материалы и оборудование. Для работы нужно иметь пикрилхлорид или оксазолон (2-фенил — 4-этоксиметиленоксазолон), оливковое масло очищенное (можно арахисовое, подсолнечное), полный адъювант Фрейнда, щипцы для маркировки ушей, мышей (самки). Ход исследования. Схема опыта: через 6—8 дней после контакта с антигеном (иммунизация) повторный контакт с тем же АГ приводит к развитию местной воспалительной реакции. В качестве места контакта выбирают ухо, реакция приводит к его утолщению. Рекомендуется использовать для постановки реакции одно и то же ухо (например, правое), а для нумерации соответственно — левое. Схема (см. таблицу ниже) зависит от силы используемого АГ и от того уровня реактивности, который намечается достичь. Схема индукции контактной сенсибилизации
Схема I применяется при работе со слабыми антигенами или при необходимости получать длительно сохраняющуюся реактивность. Схема II или III применяется при работе с сильными АГ, например в терапевтических целях или при скрининге. Группы животных: выраженность реакции в значительной мере зависит от штамма (величина набухания, разброс данных), поэтому в предварительных опытах подбирают оптимальный штамм. Желательно использовать самок, поскольку самцы часто имеют следы укусов. Ввиду необходимости тщательного контроля перекрестной реактивности животных метят не красителем как обычно, а прн помощи ушной бирки. Условия подбора представлены в таблице. Распределение животных по группам для контактной сенсибилизации
Необходимо взвешивать животных всех групп до начала и по окончании опыта, это поможет выявить общетоксический эффект исследуемых препаратов. Иммунизация и вызывание реакции: готовят 2—3% раствор пикрилхлорида в очищенном оливковом масле; 3% раствор оксазолона — на чистом спирте, иногда вместо спирта используют масло. При иммунизации по схеме I 0,2 мкмоля вещества суспендируют в 0,15 мл адъюванта (доза на 1 мышь). Инъекцию делают в основание хвоста. Для накожной аппликации 0,1 мл смеси наносят на спину животного и втирают стеклянной палочкой на площади 2—3 см2. Депиляция требуется не всегда, но если в ней возникает необходимость, то волосы выщипывают за один день до опыта (химическую депиляцию не производят). Реакцию вызывают, смазывая намеченное ухо с двух сторон тем раствором, который использовали для иммунизации. При работе с контактными аллергенами следует всегда надевать резиновые перчатки. Измерение: толщину уха измеряют при помощи любого подходящего устройства типа штангенциркуля, избегая сдавливания тканей уха. Измерение проводят, как правило, через 24 часа, в некоторых специальных случаях через 48 часов. Некоторые авторы рекомендуют электромеханическое определение толщины. Описаны способы определения гиперчувствительности замедленного типа при помощи альбумина, меченного 131[1]. Оценка результатов: если при определении толщины уха используют измерительный циркуль для покровных стекол, то толщину можно выражать в относительных величинах или в абсолютных (в мм после соответствующей калибровки). Сравнение средних значений опыта с данными позитивного контроля проводят методами вариационного анализа. Влияние депиляции на контактную сенсибилизацию мышей
Кожные реакции замедленного типа у мышей или крыс Материалы и оборудование. Для работы нужно иметь очищенный антиген, полный адъювант Фрейда, измерительный циркуль, мышей или крыс. Этапы исследования. Иммунизация и вызывание реакции. Иммунизацию проводят очищенным АГ (например, эритроциты барана, белковые препараты, аллогенная суспензия клеток), вводя его в подошву задней лапы. Обычно вводят 0,01—0,04 мл очень тонкой иглой, продвигая ее как можно дальше. При необходимости сенсибилизацию повторяют через 7 дней. Реакцию вызывают, вводя тот же самый АГ через 9—10 дней под кожу задней лапы, которую не использовали в эксперименте. Измерение и оценка результатов: в результате реакции происходит опухание той задней лапы, на которой вызывали реакцию. Степень опухания оценивают по изменению толщины лапы или ее объема. Измерительное устройство для определения объема органов
В обоих случаях требуется выдерживать одинаковые условия измерения. Ошибку можно уменьшить, измеряя средние величины отпечатков лапы, окрашенной тушью. Измерение проводят через 24 ч и по возможности второй раз через 48 ч после вызывания реакции. Сравнивают толщину (объем) обработанной и необработанной задней лапы одного и того же животного. Данные соотносят с результатами позитивного контроля с адъювантом Фрейнда (ПАФ). Кожная реакция замедленного типа у морских свинок Материалы и оборудование. Используют самок морских свинок весом 300—400 г. Нужно иметь антигены, ПАФ, туберкулиновые шприцы, электрическую машинку для стрижки шерсти, измерительный циркуль. Этапы исследования. Обычно иммунизируют животных эмульсией соответствующего АГ в полный адъювант Фрейнда АГ вводят подкожно в количестве 0,1—0,2 мл во все 4 подушечки конечностей или внутримышечно. Количества АГ может варьировать в зависимости от его природы, например, БЦЖ смешивают в количестве Т 1 мг/мл адъюванта. Интервал между иммунизациями также может меняться, для БЦЖ оптимальный интервал составляет 10 дней. Реакцию вызывают внутрикожным введением АГ в водном растворе в область спины. Непосредственно перед инъекцией на соответствующем участке кожи тщательно выстригают волосы. Не следует испытывать различные концентрации антигенов на одном и том же животном, так как малые дозы антигенов способны вызвать десенсибилизацию и искажение результатов других экспериментов. Оценка результатов исследования. Кожную реакцию замедленного типа оценивают через 24 и (или) 48 часов после разрешающей инъекции. Ниже приводятся критерии оценки результатов реакции.
При сравнении результатов, полученных на различных животных, необходимо следить, чтобы разрешающая инъекция всегда делалась в одно и то же место. |
